關(guān)鍵詞：N糖基化位點(diǎn),N糖基化,N-糖基化位點(diǎn)分析,N-糖基化位點(diǎn)鑒定,蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué),tmt,抗體測(cè)序,itraq,蛋白質(zhì)譜鑒定,蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué),tmt,抗體測(cè)序,itraq,蛋白質(zhì)譜鑒定,蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué),tmt,抗體測(cè)序,itraq,蛋白質(zhì)譜鑒定"

目前，糖基化氨基酸位點(diǎn)鑒定主要利用生物質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合蛋白酶以及專(zhuān)一性糖苷內(nèi)切酶的作用。一般先對(duì)糖基化位點(diǎn)進(jìn)行特異的質(zhì)量標(biāo)記，使之與未修飾的蛋白質(zhì)質(zhì)量之間有一個(gè)特定的差異，通過(guò)質(zhì)譜分析檢測(cè)差異，進(jìn)而通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜鑒定是在哪個(gè)氨基酸殘基上發(fā)生了糖基化。

N-聚糖蛋白的鑒定Z_U_I常用的方法是N-糖苷酶F（PNGase F）酶解法。N-糖苷酶F作為脫氨基酶，可以將原先糖基化的天冬酰胺脫氨基后轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼幔斐上鄬?duì)分子質(zhì)量增加1，再通過(guò)質(zhì)譜比較含有天冬氨酸的肽與含有非糖基化天冬酰胺的肽的相對(duì)分子質(zhì)量，即可獲得發(fā)生N-糖基化的氨基酸位點(diǎn)。N糖基化位點(diǎn)鑒定的步驟主要包括N-糖苷酶F酶消化、聚糖分離釋放、LC分離糖肽和質(zhì)譜分析。

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